Skip to content

Acylo-koenzym o średnio-łańcuchowym niedoborze dehydrogenazy i nagłej śmierci niemowląt

2 miesiące ago

1042 words

Niedobór dehydrogenazy o średnim łańcuchu acylo-koenzymu A (MCAD) jest nowo scharakteryzowanym zaburzeniem oksydacji kwasów tłuszczowych, które pojawia się w pierwszych dwóch latach życia zarówno w nagłej śmierci w domu, jak i w szpitalu, jako zespół Reye a lub encefalopatia. Szacuje się, że występuje u 1: 6000 do 1: 10 000 żywych niemowląt białych. Oczekuje się, że rocznie pojawi się około 500 nowych przypadków; jedna trzecia niemowląt umrze podczas pierwszego epizodu.1 W rzeczywistości wiele rodzin, w których wykryto niedobór MCAD, już utraciło niewyjaśnioną utratę dziecka. Zdolność do diagnozowania zaburzenia w związku z nagłą śmiercią niemowląt jest zatem szczególnie istotna: można zapobiec utracie przyszłego rodzeństwa na tę chorobę. Unikanie postu, suplementacja karnityną i szybka dożylna terapia glukozą podczas ostrej choroby wszystkie stanowią skuteczną terapię.
Obecnie niedobór MCAD można zdiagnozować za pomocą testu enzymatycznego lub analizy spektrometrii masowej. Metody te jednak nie mogą wykryć choroby w martwej tkance po śmierci, która jest zwykle jedynym rodzajem dostępnej próbki po nagłej śmierci noworodka. Ostatnio zidentyfikowano zmianę molekularną polegającą na zastąpieniu nukleotydów A-to-G w pozycji 985 komplementarnego DNA MCAD.2, 3 My i inni odkryliśmy dużą częstość występowania tej mutacji, która całkowicie odpowiada za około 90 procent wszystkich mutacji. związane z niedoborem MCAD.2 3 4 Zastosowana metoda została oparta na reakcji łańcuchowej polimerazy w celu amplifikacji małego fragmentu DNA z genomowego DNA. Wykazaliśmy jego zastosowanie w plamach krwi na kartach używanych do testowania fenyloketonurii, a także w łatwo dostępnej tkance, takiej jak pełna krew i fibroblasty skóry.
Ryc. 1. Ryc. 1. Wykrywanie mutacji A-to-G Nukleotyd-985 w tkance wątroby po uboju od dzieci, które zmarły z nieznanych przyczyn. Niedobór MCAD został zdiagnozowany w probandzie (grot strzałki) przez analizę metabolitu i oznaczenie enzymu fibroblastów.
DNA wyekstrahowano z wątroby pośmiertnej zatopionej w parafinie dwóch martwych dzieci (symbole z ukośnikami) oraz z krwi obwodowej pozostałych członków rodziny. Cienkie skrawki wytworzono z bloku parafiny, a parafinę usunięto za pomocą oktanu.5 Pozostałości przemyto etanolem i odwirowano; peletki następnie ponownie zawieszono w 10 mM TRIS (pH 8,0), mM EDTA, 0,5% Tween i proteinazie K (100 ug na mililitr). Trawienie prowadzono w 56 ° C przez godzinę, a reakcję zatrzymano przez inkubację w 95 ° C przez 10 minut. Mieszaninę zastosowano do reakcji łańcuchowej polimerazy w celu amplifikacji fragmentu genomowego DNA (63 pz [par zasad]) z niedopasowanymi starterami.2 Produkt następnie strawiono Ncol i poddano elektroforezie w 12% żelu poliakryloamidowym. Niedopasowanie stworzyło nowe miejsce restrykcyjne enzymu Ncol w zmutowanym DNA, tak aby trawienie Ncol dało dwa fragmenty (43 bp i 20 bp).
Proband był homozygotyczny pod względem mutacji A-to-G, a jej przeżywające rodzeństwo i oboje rodzice byli heterozygotyczni. Dwoje rodzeństwa, którzy zmarli z niewyjaśnionych przyczyn, było homozygotami pod względem mutacji, co wskazuje, że mieli oni niedobór MCAD.
W niniejszym raporcie przedstawiamy nasze doświadczenia z tą analizą mutacji w identyfikowaniu niedoboru MCAD w populacji z nagłą śmiercią niemowląt; użyliśmy tkanki pośmiertnej osadzonej w parafinie lub utrwalonej w formalinie Zbadano siedem rodzin, w których niemowlęta zmarły nagle z niewyjaśnionych przyczyn. Rodziny te zostały zidentyfikowane poprzez diagnozę niedoboru MCAD u kolejnego rodzeństwa żywego na podstawie wydzielania metabolitów MCAD lub testu enzymu fibroblastów. Analiza mutacyjna ujawniła obecność mutacji nukleotydowej A-to-G-985 w postaci homozygotycznej u probantów i heterozygotyczną postać zmutowanego allelu u wszystkich rodziców. W tych siedmiu rodzinach dziewięcioro dzieci zmarło z niewyjaśnionych przyczyn we wczesnym dzieciństwie. Próby pozyskania próbek tkanek lub płynów ustrojowych od tych dzieci były w dużej mierze nieskuteczne, z wyjątkiem tkanek zakonserwowanych po śmierci. Usunięto bloki parafiny dla wszystkich dziewięciorga dzieci, a ponadto unieruchomiono w formalinie tkankę wątrobową od jednego dziecka. Te umiejscowione tkanki po śmierci były przechowywane przez 18 lat. DNA ekstrahowano z nich, amplifikowano i analizowano (ryc. 1). Wszystkie próbki miały mutację A-do-G 985 w homozygotycznej postaci, ustalając w ten sposób diagnozę niedoboru MCAD i wyjaśniając nagłe zgony. Próbki krwi pobranej po śmierci były również dostępne dla dwóch niemowląt; rozpoznanie niedoboru MCAD potwierdzono za pomocą tandemowej analizy spektrometrycznej mas acylokarnityny.6
Historia niewyjaśnionej śmierci w dzieciństwie w rodzinie z żywym dzieckiem z niedoborem MCAD jest dość powszechna. Takie niewyjaśnione zgony zostały spowodowane z powodu niedoboru. Nasza analiza tkanki pośmiertnej wykazała, że dzieci rzeczywiście miały niedobór. Wyniki te podkreślają poważny charakter tego zaburzenia. Chociaż mutacja A-do-G 985 jest powszechna w niedoborze MCAD, nie występuje we wszystkich jego przypadkach. Scharakteryzowano inne mutacje. Zdolność do diagnozowania niedoboru MCAD w tkance utrwalonej pośmiertnie będzie miała jednak istotny wpływ na rozpoznanie niedoboru, ponieważ zaburzenie to często występuje jako nagła śmierć noworodka.
Jia-Huan Ding, MD, Ph.D.
Charles R. Roe, MD
A. Kimberly Iafolla, MD
Yuan-Tsong Chen, MD, Ph.D.
Duke University Medical Center, Durham, NC 27710
6 Referencje1. Roe CR, Coates PM. Niedobory dehydrogenazy Acylo-CoA. W: Scriver CR, Beaudet AL, Sly WS, Valle D., wyd. Metaboliczna podstawa dziedzicznej choroby. 6 ed. Vol. I. New York: McGraw-Hill, 1989: 889-914.
Google Scholar
2. Matsubara Y, Narisawa K, Miyabayashi S, i in. . Identyfikacja powszechnej mutacji u pacjentów z niedoborem dehydrogenazy o średnim łańcuchu acylo-CoA. Biochem Biophys Res Commun 1990; 171: 498-505.
Crossref Web of Science MedlineGoogle Scholar
3. Yokota I, Indo Y, Coates PM, Tanaka K. Podstawą molekularną niedoboru dehydrogenazy o średnim łańcuchu acylo-koenzym A: przejście od A do G w pozycji 985, które powoduje podstawienie lizyny-304 do glutaminianu w dojrzałym białku, jest jedyną powszechną mutacją. J Clin Invest 1990; 86: 1000-3.
Crossref Web of Science MedlineGoogle Scholar
4. Ding JH, Roe CR, Chen YT, Matsubara Y, Narisawa K. Mutacje w niedoborze dehydrogenazy acylo-CoA o średnim łańcuchu. Lancet 1990; 336: 748-9.
Crossref Web of Science MedlineGoogle Scholar
5. Manos MM, Ting Y, Wright DK, Lewis AJ, Broker TR, Wolinsky SM . Zastosowanie amplifikacji reakcji łańcuchowej polimerazy do wykrywania genitalnych ludzkich wirusów brodawczaków. Cancer Cells 1989; 7: 209-14.
Google Scholar
6. Millington DS, Norwood DL, Kodo N, Roe CR, Inoue F.. Zastosowanie bombardowania szybkimi atomami za pomocą tandemowej spek
[więcej w: akomex, mikrogruczolak przysadki, mazowieckie centrum neuropsychiatrii ]

0 thoughts on “Acylo-koenzym o średnio-łańcuchowym niedoborze dehydrogenazy i nagłej śmierci niemowląt”